流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)

產(chǎn)品簡介
流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)主要應(yīng)用于分析細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)、細(xì)胞受體、腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA含量等方面。

更新時間：2025-12-01

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

儀器計量設(shè)備校準(zhǔn)

常用玻璃量器校準(zhǔn) 卡爾.費(fèi)休水分測定儀校準(zhǔn) 傳遞窗計量校準(zhǔn) 液態(tài)物料定量灌裝機(jī)校準(zhǔn) 蠕動泵校準(zhǔn) 澄明度檢測儀校準(zhǔn) 崩解時限測試儀校準(zhǔn) 溫度傳感器校準(zhǔn) 凝膠成像儀校準(zhǔn) 壓力控制器計量校準(zhǔn) 壓力傳感器（靜態(tài)）校準(zhǔn) 糖量計/折光儀計量校準(zhǔn) 離心機(jī)計量校準(zhǔn) 紫外分光光度計校準(zhǔn) 電子天平計量校準(zhǔn) 細(xì)胞復(fù)蘇儀計量校準(zhǔn) 全自動細(xì)菌分歧桿菌校準(zhǔn) 分光光度計校準(zhǔn) 塵埃粒子計數(shù)器校準(zhǔn) 熒光分光光度計校準(zhǔn) 旋光儀計量校準(zhǔn) 水分儀計量校準(zhǔn) 動態(tài)光散射粒度計量校準(zhǔn) 激光粒度儀計量校準(zhǔn) 超微量分光光度計計量校準(zhǔn) 總有機(jī)碳分析儀計量校準(zhǔn) 溶出儀校準(zhǔn) 程序降溫儀校準(zhǔn) 液體流量計校準(zhǔn) 氣體流量計校準(zhǔn) 快速無菌檢測儀校準(zhǔn) 微生物限度儀計量校準(zhǔn) 過氧化氫傳感器計量校準(zhǔn) Qubit熒光計校準(zhǔn) 細(xì)胞計數(shù)儀計量校準(zhǔn) 蛋白純化儀計量校準(zhǔn) 毛細(xì)管電泳儀校準(zhǔn) PH計(酸度計)校準(zhǔn) 流式細(xì)胞儀校準(zhǔn) 計量、驗證、潔凈間檢測核酸提取儀校準(zhǔn) 熒光定量PCR儀校準(zhǔn) 氣相色譜儀校準(zhǔn) 移液器的校準(zhǔn)方法液相色譜計量校準(zhǔn) 微粒檢測儀校準(zhǔn) 溫度巡回檢測儀校準(zhǔn)

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流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)方法

1. 流式細(xì)胞儀的概述

流式細(xì)胞儀由液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和分析系統(tǒng)四部分組成。測量原理是鞘液和樣品流在噴嘴附近組成個圓柱流束，與水平方向的激光束垂直相交，染色的細(xì)胞受激光照射后發(fā)出熒光或產(chǎn)生散射光，這些信號分別被光電倍增管熒光檢測器和光電二極管散射光檢測器接收，經(jīng)過計算機(jī)儲存、計算、分析這些數(shù)字化信息，就可得到細(xì)胞的大小、活性、核酸含量、酶和抗原的性質(zhì)等物理和生化指標(biāo)。主要應(yīng)用于分析細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)、細(xì)胞受體、腫瘤細(xì)胞的DNA、RNA含量等方面。

2. 術(shù)語

等量可溶性熒光分子（MESF）：顆粒發(fā)出的熒光信號強(qiáng)度相當(dāng)?shù)目扇苄詿晒馑胤肿拥奈镔|(zhì)的量濃度。用于表示顆粒發(fā)出的熒光信號強(qiáng)度。

3.流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)

（1）環(huán)境條件

室溫為（15~30）℃，室內(nèi)相對濕度：≤70%。

（2）校準(zhǔn)使用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

a. 單一熒光強(qiáng)度的熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

b. 多重?zé)晒鈴?qiáng)度混合熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

c. 計數(shù)熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)；

d. 淋巴細(xì)胞計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

注：校準(zhǔn)時應(yīng)采用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，相對擴(kuò)展不確定度不超過20% (k=2)。

（3）校準(zhǔn)項目

a. 外觀檢查

b. 分辨力

c. 線性相關(guān)系數(shù)

d. 檢出限

e. 漂移

f. 重復(fù)性

g. 示值誤差

（4）外觀檢查

用目測、手動法進(jìn)行檢查。

（5）分辨力校準(zhǔn)

a. 儀器經(jīng)預(yù)熱，進(jìn)入正常工作狀態(tài)；

b. 在裝有0.5 mL經(jīng)過0. 22 μm濾膜過濾的磷酸鹽緩沖液的試管中，移取0.5 mL單一熒光強(qiáng)度的熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，充分混勻后上機(jī)實(shí)驗；

c. 記錄前向角散射光和488 nm激發(fā)下兩個熒光通道，包括綠色熒光（FITC 異硫氰酸熒光素）、橙紅色熒光（PE藻紅蛋白）；

d. 收集門內(nèi)有效信號10000個，計算前向角散射光和兩個熒光通道中校準(zhǔn)微球峰寬的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，即為分辨力。

（6）線性相關(guān)系數(shù)校準(zhǔn)

a. 在裝有1mL經(jīng)過0.22μm濾膜過濾的磷酸鹽緩沖液的試管中加入20μL多重?zé)晒鈴?qiáng)度混合熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，充分混勻后上機(jī)實(shí)驗；

b. 記錄488 nm激發(fā)下綠色熒光（FITC）、橙紅色熒光（PE）通道信號；

c. 對試驗結(jié)果進(jìn)行直方圖分析，熒光強(qiáng)度從低到高至少5種不同的熒光強(qiáng)度峰，每個峰收集10000個門內(nèi)有效信號，得到每個峰的平均熒光強(qiáng)度；

d. 根據(jù)校準(zhǔn)微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書提供的各個峰的等量可溶性熒光分子（MESF），將各峰的MESF取對數(shù)lg（MESF），簡化表示為y，各峰測量的平均熒光強(qiáng)度取對數(shù)lg（FITC）或lg（PE），簡化表示為x，將兩者線性回歸得到方程y=kx+b，計算兩個通道的線性相關(guān)系數(shù)（r）。

（7）檢出限校準(zhǔn)

a. 針對綠色熒光（FITC）和橙紅色熒光（PE）熒光通道，采用線性相關(guān)系數(shù)中得到的線性回歸方程y=kx+b；

b. 計算無熒光標(biāo)記的空白微球的平均熒光強(qiáng)度值對應(yīng)的MESF即為熒光檢出限。

（8）漂移校準(zhǔn)

a. 將周圍環(huán)境溫度控制在允許范圍（設(shè)定溫度±3℃）內(nèi)，在裝有1 mL經(jīng)過0.22 μm濾膜過濾的磷酸鹽緩沖液的試管中，加入數(shù)滴單色熒光微球標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，充分混勻后上機(jī)試驗；

b. 記錄前向角散射光和488 nm激發(fā)下綠色熒光（FITC）、橙紅色熒光（PE）通道的信號，收集10000個以上門內(nèi)有效信號；

c. 測試完成后，利用直方圖分析試驗結(jié)果，計算標(biāo)準(zhǔn)微球的平均熒光強(qiáng)度值；

d. 連續(xù)開機(jī)2 h后，在相同流式細(xì)胞儀設(shè)置和熒光通道電壓值的條件下重復(fù)前述試驗步驟，得到標(biāo)準(zhǔn)微球的平均熒光強(qiáng)度值；

e. 計算相對漂移率來表示穩(wěn)定性。

（9）重復(fù)性校準(zhǔn)

a. 首先制備取100 μL淋巴細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按比例添加抗原決定簇CD4抗體，輕柔渦旋充分混勻，避光存放半小時，使CD4抗體與細(xì)胞充分結(jié)合；

b. 將淋巴細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)標(biāo)記好CD4抗體后上機(jī)測試，收集10000個以上門內(nèi)有效信號；

c. 重復(fù)測量6次，依次記錄每次測量的CD4陽性細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分比，計算CD4陽性細(xì)胞數(shù)量占總淋巴細(xì)胞的百分比的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，作為重復(fù)性的評價。

（10）示值誤差校準(zhǔn)

按照測量重復(fù)性實(shí)驗中得到的CD4陽性細(xì)胞占總淋巴細(xì)胞的百分比，計算平均值，然后計算示值誤差，最后評估示值誤差校準(zhǔn)不確定度。

流式細(xì)胞儀校準(zhǔn)

公司背景介紹：

澤恒.華譜在計量校準(zhǔn)、驗證與確認(rèn)的優(yōu)勢是專注做生物制藥質(zhì)控服務(wù)，針對一些特殊的儀器都非常熟悉，核心團(tuán)隊來源于制藥公司和儀器廠家，對儀器和GMP法規(guī)都很熟悉，比如：我們團(tuán)隊專門研發(fā)了替代進(jìn)口的熒光定量PCR儀校準(zhǔn)裝置，大大降低熒光定量/定性PCR儀校準(zhǔn)的成本（遠(yuǎn)低于同行）；我們開發(fā)了細(xì)胞計數(shù)儀的校準(zhǔn)內(nèi)部規(guī)程；開發(fā)了細(xì)胞復(fù)蘇儀的內(nèi)部校準(zhǔn)規(guī)程；開發(fā)了凝膠電泳掃描儀的校準(zhǔn)規(guī)程；我們開發(fā)了溫度驗證所需要的超低溫和超高溫一體化無線探頭，降低用戶大量使用探頭時的成本，代替了進(jìn)口；這些例子還有很多，因為我們都是生物出身，所以我們關(guān)注每一個生物用戶工藝要求，在生物制藥儀器設(shè)備上面專注，“與質(zhì)量同行、做儀器設(shè)備質(zhì)控"，為了讓生物制藥更安全而努力。

我們在服務(wù)上與其它單位密切合作，包括強(qiáng)檢、特檢或做不了的都幫客戶代送代取，省時、省力、方便客戶。

澤恒.華譜是專注于為生物制藥行業(yè)提供實(shí)驗室儀器計量校準(zhǔn)、儀器設(shè)備驗證與驗證/廠房驗證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程部/驗證部/生產(chǎn)部的質(zhì)控外包服務(wù)。

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